القاء پاسخ ايمني هومورال عليه ويروس هرپس سيمپلكس تيپ يك
با به كار گيري گليكوپروتئين نوتركيب D ويروس در موش هاي BALB/C
دکتر حوريه سليمانجاهي1، دکتر محمدحسن روستايي2، دکتر محمدجواد رسايي3، ، دکتر انوشيروان كاظم نژاد4،
دکتر زهرا مشكات5، دکتر كيوان زندي6
1 استاديارگروه ويروس شناسي، دانشكده علوم پزشكي، دانشگاه تربيت مدرس
2 استاد گروه ويروس شناسي، دانشكده علوم پزشكي، دانشگاه تربيت مدرس
3 استاد گروه بيوشيمي، دانشكده علوم پزشكي، دانشگاه تربيت مدرس
4 دانشيار گروه آمار زيستي، دانشكده علوم پزشكي، دانشگاه تربيت مدرس
5 دانشجوي دكتري ويروس شناسي، دانشكده علوم پزشكي، دانشگاه تربيت مدرس
6 استاديار ويروس شناسي، دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشکي بوشهر
يكي از مهمترين گليكو پروتئين هاي سطحي ويروس هرپس سيمپلكس تيپ يك (HSV-1)، گليكو پروتئينD (gpD) است كه با داشتن ويژگي آنتي ژنيسيتي و ايميونوژنيسيتي بالا, باعث القاء پاسخ ايمني در بدن ميزبان مي شود. با توجه به شباهت زيادي كه بين زنجير نوكلئوتيدهاي ژن كد كننده gpD بين اين ويروس و ويروس هرپس سيمپلكس تيپ 2 (HSV-2) وجود دارد، بنابر اين كانديداي مناسبي براي توليد واكسن ريكامبيننت محسوب مي شود. در اين پژوهش براي توليد gpD نوتركيب ابتدا با كيولوويروس حاوي ژن كامل gpD در ياخته هايSf9 (Spodoptera frugiperda) تكثير داده و 4-5 روز پس از انكوباسيون، ياخته هاي آلوده جمع آوري وتحت عمل سونيکاسيون قرار گرفت. پس از اندازه گيري مقدار پروتئين موجود در شيرابه سلولي، در كنار شيرابه حاصل از ياخته هاي شاهد SDS-PAGE و آنگاه با محلول كوماسي بلو رنگ آميزي و الگوي الكتروفورز پروتئين ها تعيين شد. در مرحله بعد با انتقال پروتئين هاي الكتروفورز شده از روي ژل به كاغذ نيتروسلولز و با استفاده از به ترتيب آنتي بادي پلي كلونال اختصاصي، آنتي بادي ضد ايمنوگلوبولين هاي انسان نشاندار، و سوبستراي مناسب روش وسترن بلاتينگ انجام و صحت وجود gpD نوتركيب تأييد شد. به منظور بررسي ويژگي ايمن زايي gpD نوتركيب توليدي اقدام به تزريق داخل عضلاني به يك گروه 7 تايي از موش هاي BALB/c سه هفته اي شد. ضمناً همين تعداد موش نيز براي گروه شاهد و گروه ويروس كه به ترتيب با PBS و ويروس حاد مورد تلقيح قرار گرفته بودند, مورد استفاده قرار گرفت. جمعاً 3 تزريق با فواصل 21 روز انجام شد و 21 روز بعد از آخرين تزريق از تمام موش ها خونگيري به عمل آمد. آزمايش خنثي سازي ويروس حاد با استفاده از سرم خون موش هاي گروههاي سه گانه انجام شد و نتايج نشان داد كه gpD نوتركيب توانسته بود تا در موش هاي تزريق شده باعث ايجاد آنتي بادي هاي خنثي كننده ويروس هرپس سيمپلكس تيپ يك شود.
واژگان کليدي : گليكوپروتئين D، ايمنوژنيسيتي، هرپس سيمپلكس تيپ يك با كيولوويروس، تست خنثي سازي ويروس